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Chinese Name

中文名


D-荧光素

English Name

英文名


D-Luciferin

Alias

别名


(S)-2-(6-Hydroxy-2-benzothiazoly)-2-thiazoline-4-carboxylic acid;Firefly Luciferin


CAS NO.


2591-17-5

Formula

分子式


C11H8N203S2

M.W.

分子量


280.32

Class

分类


生化试剂


活体成像技术(optical in vivo imaging)目前主要采用生物发光(bioluminescence)与荧光(fluorescence)两种技术,生物发光法是基于荧光素酶能催化底物(D-Luciferin或Coelenterazine)化学发光的原理,将体外能稳定表达荧光素酶的细胞株植入动物体内,与后期注射入体内的底物发生反应利用光学系统检测光强度,间接反映出细胞数量的变化或细胞的定位。这项技术已被广泛应用于多个领域,最常用的有肿瘤或疾病动物模型的建立,并可用于病毒学研究、siRNA研究、干细胞研究、蛋白质相互作用研究等。

原理:常见的荧光素酶有两种,分别是萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,编码基因是luc)和海肾荧光素酶(Renilla luciferase,编码基因是Rluc),前者的底物是D-Luciferin,后者的底物是Coelenterazine。它们共同的作用原理是在ATP和荧光素酶的催化作用下,底物被氧化发光(不同底物光的颜色和波长不同),当底物过量时,产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性。
应用:
1)体外化学发光分析(in vitro);
2)活体成像实验(in vivo); 
3)高灵敏度ATP分析;
4)活细胞、组织或生物体内luc标记基因和荧光素酶-融合基因体内/体外表达的成像分析;
5)广泛用于报告基因分析,免疫分析和ATP荧光卫生监测分析;
步骤:
Protocol 1In Vitro Bioluminescent Assays / 体外生物发光检测
1)用33.3 mL蒸馏水溶解1.0 g D-荧光素,配制成100 mM的储存液(200×,浓度30mg/ml)。混匀后立即使用或分装后-20℃冻存。
2)用组织培养基1∶200稀释储存液,配置工作液(终浓度150μg/mL)。
3)去除培养细胞的培养基。 
4)待图像分析前,向细胞内添加1×荧光素工作液,然后进行图像分析。
Protocol 2:In vivo analysis / 活体成像分析
1)用无菌的PBS(w/o Mg2+、Ca2+)配制D-荧光素工作液(15mg/mL),0.2 um滤膜过滤除菌。一旦使用,保持冰冷且避光。
2)注射量取决于注射方式,具体如下:
注射方式剂量静脉注射(25-27 gauge针头)按10 uL/g体重浓度,加入相应体积的15 mg/mL荧光素工作液 腹腔注射(25-27 gauge针头)按10 uL/g体重浓度,加入相应体积的15 mg/mL荧光素工作液肌肉注射(27 gauge针头)50 uL,浓度为1–2 mg/mL荧光素工作液鼻内注射(pipette)50 uL,浓度为3 mg/mL荧光素工作液3)注射入体内5-10分钟后,进行成像分析。
溶解:0.25%浓度溶解于甲醇,形成近乎无色至浅黄色的清夜
保存:-15°C 避光











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